PRODUCT CLASSIFICATION
產(chǎn)品分類(lèi)植物(Plant)茉莉酸異亮氨酸(JA-Ile)ELISA檢測試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被茉莉酸異亮氨酸(JA-Ile)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的茉莉酸異亮氨酸(JA-Ile)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長(cháng)下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2. 標本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻進(jìn)行。
3. 植物萃取液或其它相關(guān)樣本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測。
4. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì )有結晶,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
2. 實(shí)驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3. 濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍,最終結果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。
4. 嚴格按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、62.5、125、250、500、1000 pmol/L
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1:20稀釋?zhuān)?份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
2. 自動(dòng)洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。
結果判斷
繪制標準曲線(xiàn):在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn),按曲線(xiàn)方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1. 準確性:標準品線(xiàn)性回歸與預期濃度相關(guān)系數R值,大于等于0.9900。
2. 靈敏度:檢測濃度小于10 pmol/L。
3. 特異性:不與其它可溶性結構類(lèi)似物交叉反應。
4. 重復性:板內、板間變異系數均小于15%。
貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
郵箱:2450868877@qq.com
傳真:86-區號-傳真號碼
地址:上海市楊浦區鐵嶺路32號1519-10室