馬Elisa試劑盒試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應用,但操作中的各個(gè)環(huán)節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。下面我們談?wù)劜僮髦懈鱾€(gè)環(huán)節常出現問(wèn)題的原因及解決辦法。
下面分析馬Elisa試劑盒試驗操作中可能影響結果的原因,并給出相應的解決辦法
選擇馬Elisa試劑盒:選擇質(zhì)量?jì)?yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2加樣可能原因:)血清或血漿標本分離不好即進(jìn)行加樣;2)手工操作中,加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(cháng)(特別是室內溫度較高時(shí));
3)加完標本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。解決辦法:)標本為血清:將血液先自然存放-2小時(shí)后,再用3000rmp離心5分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒混合5-0次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心5分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。2)加樣后及時(shí)放入孵箱。3)加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。4)如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。5)標本較多時(shí),請分批操作。
3孵育可能原因:)孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*;2)孵育時(shí)間人為延長(cháng),導致非特異性結合緊附于反應孔周?chē)y以清洗*。解決辦法:)貼封片或加蓋;2)按說(shuō)明步驟嚴格控制操作時(shí)間。
4洗板可能原因:)采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。2)采用半自動(dòng)洗板機洗板時(shí),洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。3)反應板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(cháng)。解決辦法:)保證洗液注滿(mǎn)各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;2)合理安排,或多用幾臺洗板機。
5顯色可能原因:)顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(cháng)或使用過(guò)期顯色劑;2)加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:)顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍色的TMB顯色劑不用;2)加樣時(shí)保持顯色劑不外流;3)A、B液應避免接觸金屬器械。6終止可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應避免產(chǎn)生氣泡。7讀板如讀板時(shí)板底不清潔等。應保證酶標板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標板不接觸次氯酸;盡可能實(shí)現馬Elisa試劑盒檢測標準自動(dòng)化,有效提高檢測質(zhì)量。